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用比色法测试干酪中的柠檬酸

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 1.原理概要

    把干酪分散在水中,用CCl3COOH沉淀蛋白质。用吡啶和Ac2O处理滤液,在428nm测量黄色柠檬酸络合物的A。
2.仪器和试剂
2.1 仪器
试管——16或18×150mm,带玻璃塞或塑料塞。
2.2 试剂
    (a) 三氯乙酸溶液——1.836M。把300g CCl3COOH溶于H2O,并稀释到1L。
    (b) 柠檬酸标准溶液——0.003252M。把0.9565g柠檬酸三钠盐(C6H5O7Na3·2H2O)溶于H2O并稀到1L。
3.试验过程
3.1.样品的制备
    准确称取约0.5g制备好的样品18-6,18-76和18-77,放在瓷研钵中。用研杵捣碎分散,加少份温水(60—70℃)。用不超过50ml H2O定量转移到100ml容量瓶中。冷却到室温并加40ml CCl3COOH溶液,旋动混合,用水稀释到体积,再重新混合。在室温放置30min,用干坚固的纸过滤。弃去滤液 (≥10ml)直到滤液是清的。
3.2.测定
    移取1ml清滤液放入试管。加1.3ml吡啶,混合,并马上加5.7ml Ac2O。塞住管子,充分混合,并放在32℃H2O浴中。
    30min后,从水浴中取出试管,冷却到室温,干燥并在428nm处相对于空白测量片。根据标准曲线把读数转变为无水柠檬酸的μg。
    无水柠檬酸%=W'/(100×W)
式中W'=从标准曲线得到的无水柠檬酸的微克数,W=样品重。
3.3.标准曲线的绘制
    转移0,4,8,12,16和20ml柠檬酸标准溶液(c)分别放到50ml容量瓶中,加水使各瓶中总体积约为25ml。每个瓶中各加20mlCCl3COOH,旋动混合,用水稀释到体积,再混合。
    从每个容量瓶各取1ml分别放入试管中,制备含0,50,100,150,200和250μg无水柠檬酸的标准。按D进行测定。
    以A对柠檬酸微克做图制作标准曲线。
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